bisulfite sequencing　亚硫酸氢盐测序法

亚硫酸氢盐测序法是目前分析DNA甲基化最直接的方法。用亚硫酸氢钠诱导DNA氧化脱氨，非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后用CpG岛两侧不含CpG点的一段序列为引物配对区设计引物，进行扩增并进行测序。与未经处理的序列比较，判断是否CpG位点发生甲基化。测序法分为克隆测序和直接测序。克隆测序能提供CpG岛甲基化状态的准确信息，适用于半甲基化或细胞构成复杂的样品甲基化分析。它的不足是耗费时间和费用过多，至少需要10个以上的克隆才能获得可靠数据。直接测序法包括全片段测序和CpG单点测序，适用于杂合性小的细胞系样品和甲基化状态均一的组织样品分析，在结果判断上比克隆测序困难。